 |
| ||
 |
|||
|
| ||
|
|||
|
广西水产科技 2000年第3期（总第95期） 斑鳠人工繁殖与鱼种培育试验研究 杨家坚林 勇 陈 忠 梁军能 (广西水产研究所 南宁 530021) 提 要 采用单一或混合使用鲤鱼脑垂体、LRH-A2和HCG的方法，对池塘人工养殖7年的斑鳠亲鱼进行8批19组人工催产，收集鱼卵151 990粒，催产率达100%；采用自然产卵或人工授精的方式获得受精卵106 450粒，受精率58.2%～82.5%，平均值达70%；孵出全长1.2～1.5cm鱼苗33 808尾，孵化率8.2%～58.1%，平均值为31.8%。使用丰年虫、水蚯蚓等鲜活动物性饵料投喂，经16～21天培育，在12个水泥池和12个水族箱中培育出3～5cm鱼种20 365尾，成活率44.3%～87.6%，平均值为60.2%，取得了斑全人工繁殖的成功，填补了国内在这方面研究的空白。 关键词 斑鳠 人工繁殖 鱼种培育 本所1991年以来，一直致力于斑鳠人工养殖技术开发研究，但限于各种条件和经费投入不足，研究进展不大。1998年调整充实课题组主要成员后，多方争取支持，在原有工作基础上，采用综合攻关的技术策略，从亲鱼强化饲育入手，进行营养饲料研制与投喂试验，改善池塘水质环境条件，定期检查亲鱼性腺发育，药物催熟等较系统的研究方法，并进行人工催产试验获得成功，孵化出1.2～1.5cm鱼苗2 500尾，并培育出18.0～30.0cm鱼种1 000多尾。1999年，课题组利用春暖水温回升早的有利季节，采取提前强化饲育催熟的方法，自4月初至7月底的3个多月时间里，用池塘饲养7年培育而成的亲鱼进行第2代斑鳠人工繁殖试验，取得突破性进展，填补了国内在这方面研究的空白，现将人工繁殖试验结果综述如下： 一、材料与方法 1材料 (1)亲鱼来源与培育 人工繁殖用亲鱼是本所1992年捕获江河斑鳠催产成功获得的少量鱼苗在池塘与鲢鳙鱼混养7年的成熟个体。雄鱼体重为3.2～5.1kg，雌鱼个体2.2～6.8kg。亲鱼在使用前进行1年左右的营养饲料强化培育。 (2)试验条件 ①亲鱼暂养池 使用6个长方形水泥池进行亲鱼暂养。其中3个规格5.0m×2.0m、单池面积10m2；另外3个为4.0m×3.0m、面积12m2。暂养池池底模拟江河自然环境铺设细的卵石，安装供、排水系统。 ②产卵池 使用2个长方形水泥池作为亲鱼产卵池，规格为4.0m×2.0m，池深1.2m，池底铺设1层粗的卵石。除同样安装供、排水系统外，还配备5cm和10cm管径的抽水机2台，用于调节池水循环及控制水的流速。 ③孵化设备 2m2小型环道孵化池1个，46cm×46cm孵化网片36片，直径40cm容量6L的圆形玻璃培养缸30个，80cm×60cm孵化网箱8个。此外，还有孵化箱和鼓风机等一批设备。 ④鱼苗培育 使用长方形水泥池12个，规格为5.0m×2.0m×0.7m。蓄水池若干个，总容量约60m3，水族箱12个，规格为1.2m×0.6m×0.45m。 ⑤药物 人工催产使用的药物主要有鲤鱼脑垂体(PG)、绒毛膜促性腺激素(HCG)、促黄体素释放激素A2(LRH-A2)3种。 2方法 (1)亲鱼培育、起捕与挑选 亲鱼培育 亲鱼进行人工繁殖前，经过1年左右的强化饲育，主要投喂本课题组模拟野生斑鳠天然饵料成份配制的营养饲料，并加强管理，早晚使用叶轮式增氧机增氧。 亲鱼起捕 在推定的人工繁殖季节，即4～7月份，每隔15～20天从饲养池塘中起捕亲鱼1次。 亲鱼挑选 根据鱼类性腺发育成熟的基本特征进行挑选。雌鱼一般选择外观体色稍深褐色、腹部膨大、手感柔软的个体。雄鱼则挑选个体相对较大，外观体色淡白、健壮的个体。亲鱼挑选后移入暂养池暂养，雌雄比为1∶2。每个暂养池的放养数量视情况而定。 (2)人工催产 使用鲤鱼脑垂体(PG)、LRH-A2、HCG 3种药物进行人工催产，采取单一药物或混合药物两种方法进行对比试验，用两针注射法进行注射。 (3)自然产卵 为探索斑鳠自然产卵的环境条件，本研究试验设计了模拟自然产卵场，在推定与江河野生斑鳠繁殖的同步时间内进行了试验。其条件设置为： ①在选定的产卵池底部铺设一层5cm厚度的鹅卵石； ②池上搭棚遮光，保持池内黑暗； ③改造水池边角为半椭圆形，使之无死角，水深保持1.2～1.5m； ④池内安装5cm和10cm口径抽水机各1台，用作调节池水循环； ⑤在池底铺设的鹅卵石上均匀安放6～8个窄口圆柱状塑料产卵桶(直径60cm，高90cm)。 (4)人工授精、孵化与胚胎发育 人工授精 研究试验采用半湿法，即雌鱼催产后，在设定时间内，不管是顺产或人工采(挤)卵，都把获得的卵收集于消毒的白瓷盆内。同步采用解剖方法取出雄鱼精巢剪碎后盛于消毒的砚钵内磨碎，然后加入少量生理盐水稀释精液，最后把鱼卵和精液在轻轻摇动的状态下使之充分受精。 孵化 将收集的受精卵经脱粘或用清水冲洗干净后，使用小型孵化环道池，孵化片及玻璃缸3种容器进行孵化。同时，为研究不同孵化方式的孵化效果，还进行了玻璃缸静水、微流水、微流水+充氧等3种孵化方式的比较试验。 胚胎发育 采用日产解剖镜连续观察拍照的方法对斑胚胎发育的每个阶段进行了观察研究。 (5)鱼苗培育 孵出的鱼苗收集后分别使用12个水泥池(规格5.0m×2.0m×0.7m)和12个水族箱(1.2m×0.6m×0.45m)进行培育。培育用水为充分爆气的自来水，饵料使用鲜活的丰年虫、水蚤、水蚯蚓、鲜鱼肉等。鱼苗培育采用定时定量投饵、添加新水、吸污和定期监测水质的方法进行。 二、结果与分析 1人工繁殖 本研究进行的斑鳠人工繁殖从1999年4月20日开始，7月28日结束，历时3个多月。先后使用1992年本课题组捕获江河成熟斑鳠进行人工孵化获得的鱼苗在池塘养殖7年的亲鱼共48尾，(♀20尾，♂28尾)，进行8批19组的人工催产繁殖试验，收集鱼卵151 990粒，催产率达100%；获得受精卵106 450粒，平均受精率为70.0%(范围在54.5%～88.9%)；孵化出全长1.2～1.5cm鱼苗33 808尾，平均孵化率为31.8%(范围在8.2%～58.1%)；孵化出的鱼苗经20天左右的培育，获得全长3.0cm以上的规格鱼种20 365尾，平均成活率为60.2%，最高达87.9%，详见表1(略)。 亲鱼饲育 试验用亲鱼的饲育在本所7号塘(1 333m2)和13号塘(2 667m2)进行，使用本课题组模拟野生斑天然饵料成份研制的1#、2#、3#、4#营养饲料进行强化饲育，经1年多的时间，2口池塘饲养的140尾亲鱼大部分性腺发育良好，雄鱼95%以上可用于人工解剖授精，雌鱼约有50%达到催产要求。经挑选用于人工繁殖的亲鱼共47尾(♀19尾，♂28尾)，利用率达33.6%，亲鱼强化饲育效果良好。 亲鱼鉴别 成熟的斑鳠具有一般鱼类发育成熟的基本特征。研究选用的雌鱼采用目测和人工挖卵镜检的方法进行鉴别，外观体色稍深、腹部明显比雄鱼膨大而丰满，手感松弛、柔软，卵巢轮廊明显，生殖孔和泌尿孔外突稍展开，周围呈紫红色，范围比雄鱼大。人工检查采用挖卵器(鸭毛)从泄殖孔入伸3～5cm挖取少量卵母细胞放置于培养皿中，然后用透明液(无水醋酸和酒精以1∶1配制而成)处理15～20min，最后在解剖镜下测定卵母细胞的直径，观察核偏离情况进行成熟度的鉴别。一般卵母细胞直径达到3.5mm以上，核偏离明显的雌鱼，用于人工催产效果好。雄鱼成熟度鉴别除了根据养殖年限(一般6年以上)进行经验判断外，外观体色稍淡白，腹部没有雌鱼膨大饱满，生殖孔前方有黑色素斑，泄殖孔周围呈微红色，但范围没有雌鱼生殖孔周围的紫红色大。采用这些鉴别方法挑选的47尾亲鱼，进行人工催产繁殖均取得如表1的较好效果。 (2)人工催产 在历时3个月的时间里，先后进行8批19组人工催产试验，时间分别为：4月20日、5月8日、5月19日、6月15日、6月19日、6月28日、7月1日和7月5日。以单一或混合使用鲤鱼脑垂体PG、LRH-A2和HCG 4种方法进行催产效果比较。药物使用前用0.7%的生理盐水稀释溶解，注射量按亲鱼体重以0.5ml/kg进行，注射部位为背部肌肉。不管采用哪种方法注射，第1针注射量为总量1/5～1/3，第2针注射剩余部分，两针相隔24h。采用上述方法对47尾亲鱼进行催产，效果显著。19尾雌鱼都能顺产或人工采卵，28尾雄鱼解剖全部能进行人工授精，催产率达到100%。 (3)自然产卵 在人工设置的模拟产卵场(水泥池)内，于6月19日和6月28日分3批移入亲鱼10尾，其中雌鱼3尾，雄鱼7尾，♀♂配比为1∶2或1∶3。三组试验亲鱼用的催产药物为鲤鱼脑垂体和LRH-A2混合剂，注射量和其它人工催产亲鱼相同。当注射第1针的亲鱼移入人造产卵场后开动5cm口径抽水机抽水，使池内水流形成微循环流动。注射第2针8～10h后增加开动10cm口径抽水机抽水，加大产卵池内水流的循环速度(一般保持1.5m/s)，对试验亲鱼进行流水刺激，促使其发情、追逐、产卵。同时，每小时注入总水量25%的新水，以保持池内水质清新，观察亲鱼的产卵行为。3次试验观察，只有6月19日这一组的雌鱼在人工催产药效时间(24h)内发情追逐雄鱼，但雄鱼没有作出交配反应，甚至逃避雌鱼的追逐，最终雌鱼自行产卵。因雄鱼不同时排放精子，产出的卵没有受精浸水后不能孵化(收集计数为6 320粒)，其余2组在效应时间内不能顺产，最后进行人工采卵和解剖雄鱼受精，获得受精卵9 066粒，孵出鱼苗2 700尾。至此，人工设置的模拟产卵场试验没有效果。这说明本研究设计的人工模拟产卵场(水池)环境尚不能满足斑鳠自然产卵的条件。 (4)受精、孵化与胚胎发育 受精 斑鳠卵为粘性卵，自然产卵为成熟的雌雄鱼同步排放精卵在水中受精。本试验采用半湿法对8批19组亲鱼所采集的卵子(151 990粒)和解剖雄鱼取得的精子进行人工授精，结果获得受精卵106 450粒，平均受精率为70.0%。其中效果最好的是7月5日的第8批受精卵，受精率高达88.9%，最差的是4月20日的第1批，只有54.5%(见表1)。 孵化 采用前述三种孵化方式将收集8批19组亲鱼的受精卵分别脱粘或用清水冲洗干净后进行孵化，结果孵出全长1.2～1.5cm的鱼苗共33 808尾，平均孵化率为31.8。其中效果最好的是5月19日的第3批，孵化率达58.1%，最差的是4月20日第1批，只有8.2%。孵化期间的水温变化在23.3℃～30.4℃；最高的是第8批，水温变化为30.1℃～30.4℃；最低是第1批，水温为23.3℃～23.6℃。孵化经过时间为42.3～56.0h，最短是第8批，只需42.3h，最长是第1批，需要56.0h(见表1)。 胚胎发育 为解明斑鳠胚胎发育每个阶段的变态特征(形状、图像)及所需要时间与条件，除采用3种不同容器及3种不同方式进行比较试验外，自4月20日开始，使用日产解剖镜对8批孵化自受精卵开始进行连续的胚胎发育观察和拍照，测得卵子直径范围为3.2mm～4.5mm，平均值为3.7mm。在水温23.3～30.4℃的变化范围内，每批受精卵经过细胞分裂期、囊胚期、原肠期、神经胚期、胚孔封闭期、体节出现期、出膜期等25个阶段到最后鱼苗出膜所需时间为42.3～56.0h，平均时间为49.8h。从8批受精卵的胚胎发育观察结果看出，水温越高，胚胎发育变态越快，所需时间就越短。如第8批，只需42.3h(水温范围30.1～30.4℃)。相反则慢，需要的时间就长，如第1批，需要56.0h(水温范围23.3～23.6℃)。根据观察，斑鳠胚胎发育的适宜水温为25.0～28.0℃，其胚胎发育每个变态阶段及经过时间见斑胚胎发育图谱。 (5)鱼种培育 收集孵出的8批鱼苗(1.2～1.5cm)，按时间先后分别移入水泥池(规格5.0m×2.0m×0.7m)和水族箱(规格1.2m×0.6m×0.45m)中进行培养，在水温23～31℃变化范围内，采用充氧、投喂动物性鲜活饵料、定期吸污和进行水质监测的方法进行培养。结果8批33 808尾鱼苗，分别经16～21天精心培育，达到3cm以上规格的鱼种存活20 365尾，平均成活率为60.2%，最高的第2批达87.6%，最低的第7批只有44.3%，详见表2(略)。 鱼苗培育前10天主要投喂丰年虫、水蚤，每天投喂6次。10天以后改投水蚯蚓和鲜鱼肉，每天3次。投饵量以1h内基本食完为宜，每天上午和下午吸污和测定水温各1次。水质监测每5天进行1次，内容包括DO、NH3-N。一旦发现问题及时采取措施。在整个苗种培育过程中，各批次鱼苗培育水体的几个重要水化指标均值都控制在适宜范围：DO含量最高为7.6mg/L，最低为6.3mg/L；NH3-N浓度控制在0.4～1.6mg/L之间。采用上述方法培育鱼种取得了如表3的较好效果。 2几种试验的比较效果 鉴于斑鳠全人工繁殖在国内尚属首次，为解明其相关技术参数，本研究在搞好人工育苗工作同时，设计进行了不同药物的催产等5种比较试验。 (1)不同药物的催产试验 为筛选出斑鳠人工催产理想的药物种类及剂量，本研究设计使用鲤鱼脑垂体(PG)，绒毛膜促性腺激素(HCG)，促黄体激素释放激素A2(LRH-A2)等3种药物组成的PG、LRH-A2、PG+HCG和PG+LRH-A24个单一或混合药物的试验组进行不同药物的催产比较试验，各药物组的催产用药剂量及效果列表3(略)。 (2)不同水温的胚胎发育经过时间观察 为查明斑鳠人工繁殖胚胎发育的最适水温范围，在8批试验孵化过程中，我们选择4月20日水温为23.3～23.6℃的第1批，6月15日水温为26.0～26.5℃的第4批和7月5日水温为30.1～30.4℃的第8批共3批的受精卵进行孵化全过程的观察，采用日产解剖镜对3种不同水温条件下胚胎发育经过的时间进行连续观察试验，结果列表4(略)。 从表4数据得知，3种不同水温的受精卵到出膜经过的胚胎发育时间依次为56h，50h12min、42h17min。斑鳠的胚胎发育在水温30.4℃以下的条件下，水温越高，胚胎发育经过的时间越短。从3种不同水温孵化试验的出膜时间分析，在23.3～30.4℃水温范围内，水温升高1℃，孵化时间缩短约2h。提高水温虽然能够缩短孵化时间，减少水霉滋生，提高孵化率，但并非水温越高越好。试验观察发现，当水温高于30℃时，胚胎发育出现畸形现象(这可能与高水温导致发育不平衡相关)，结合8批受精卵的胚胎发育的观察结果综合分析，我们认为：斑鳠的适宜孵化水温范围在23～28℃之内，最适水温为25～26℃(见表1中5月19日的孵化水温与孵化率)。这与家鱼人工繁殖胚胎发育的一般规律基本吻合。 (3)不同孵化方式对孵化率的影响 为研究斑鳠人工繁殖过程中适宜的孵化方式，研究设计进行了静水、微流水、微流水+充氧等3种方式的孵化比较。为避免人为操作上的失误，试验采用6个水族箱(1.2m×0.6m×0.45m)，分A、B、C 3组进行，每组重复一个水族箱共2箱。微流水的水量控制在8小时循环更换1次。3组试验同步移入7月5日第8批人工授精卵3 000粒，平均每箱移入500粒。孵化经过时间约为42.3h，水温范围为30.1～30.4℃，结果列表5(略)。 |