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南方鲆腹水症的病原分离鉴定及防治措施
探讨
黎铭 陈晓汉 谢达祥 李咏梅 曾地刚 蒋伟明 彭敏 马宁杨 春玲
(广西水产研究所 南宁
530021)
摘
要
从具有典型腹水病症状南方鲆的内脏分离细菌，经生化鉴定均为迟钝爱德华细菌。将纯化鉴定后的细菌对健康南方鲆进行人工感染，结果表明分离病原菌可引起南方鲆典型的腹水症状。对分离病原菌进行药敏试验，发现该细菌对链霉素等高度敏感；实践用药进一步证明，链霉素对南方鲆腹水症具有较好的治疗效果。
关键词
南方鲆 腹水症 迟钝爱德华细菌 药敏试验
南方鲆（Paralichthys
Lethostigmo）又称大西洋漠斑牙鲆、美国漠斑牙鲆，隶属硬骨鱼纲、鲽形目、鲽亚目、鲆科、牙鲆亚科、牙鲆属，是深海底栖鱼类，是美洲众多鲆鲽鱼类中个体最大的一种，自然分布于美国北卡莱罗纳州至佛罗里达州南部海湾，得克萨斯州南部海峡沿岸也有分布［1-3］。南方鲆生长水温在1℃～35℃，宜养水温为18℃~30℃；耐盐范围在0～60，最适盐度5～30，经稚鱼变态到幼鱼后可直接在淡水中养殖［4-6］。其肉质鲜嫩，营养价值高，在国外，如美国、日本、韩国等倍受消费者青睐，市场价格高。由于以上特点，南方鲆成为我国南方沿海地区重点引进和繁殖的新品种，尤其是陆上工厂化养殖和海水网箱养殖。但是，由于气温、水质以及养殖密度等因素的影响，该鱼的病害也越来越多，特别是腹水症尤为严重。本实验从具有典型腹水病症状的南方鲆内脏分离细菌,并对分离菌的生化特性、致病性、以及药物敏感性进行分析，以便筛选出对南方鲆腹水病治疗效果好的药物。
1材料与方法
1.1材料
送检南方鲆来自广西水产研究所海水养殖基地，病鱼10尾，健康鱼12尾，体重为200～250g。药敏试纸购自杭州天和微生物试剂有限公司。
1.2细菌分离和培养
取具有典型腹水病症状的南方鲆，用清水将鱼体冲洗干净，再用75%的酒精棉球拭擦鱼体，待酒精挥发稍干后剪开腹部，用接种环取腹水、肝脏、心脏、肾脏组织样品接种到普通琼脂平板和血液琼脂平板，然后放置恒温箱，37℃条件下培养24h。同时取病鱼的腹水、肝脏、心脏、肾脏组织进行涂片、染色，显微镜观察。
1.3细菌的纯化与鉴定
对分离培养得到的细菌进行革兰氏染色，显微镜观察，与组织抹片镜检的细菌进行对比，找出染色特征与组织片一致的菌株。对该菌株进行传代分纯，然后生化鉴定。
1.4细菌感染试验
将分离到的菌株接种到普通肉汤培养基，37℃条件下培养24h。以02ml/尾的接种量对健康南方鲆腹腔注射菌液，对照组腹腔注射02ml无菌普通肉汤。试验组和对照组分别置于水族箱养殖。
1.5药敏试验
采用纸片扩散法。
1.6药物治疗试验
用筛选出的药物进行注射和拌饵投喂治疗。
2结果
2.1发病情况以及临床特征
送检场2006年5月引进南方鲆鱼苗，于2007年3月份开始出现病鱼死鱼现象，病鱼在临死前表现为食欲减退乃至废绝，体色发黑，频繁游动上浮，腹部肿大，肛门红肿、脱出。解剖观察：有大量淡黄色、透明液流出；肝脏肿大，颜色变红；胆囊肿涨；肾脏肿大，暗红；肠道肿胀，剖开可见有大量炎症渗出物。
2.2细菌分离结果
从10尾病鱼的腹水、肝脏、心脏、肾脏分离出了细菌40株，各菌株的菌落特征均一致：在普通琼脂平板上呈白色，圆形，边缘整齐，直径约0.6~0.8mm。显微镜下观察，细菌为革兰氏阴性，杆状，无芽孢，无荚膜，各菌株的显微形态无明显差别。健康鱼的腹水、肝脏、心脏、肾脏无细菌被分离出。
2.3细菌鉴定结果
经全自动细菌鉴定仪鉴定结果，分离出的40株细菌均为迟钝爱德华细菌，测定项目结果见表1。
表1
细菌生化鉴定结果
项目（缩写） 结果
项目（缩写） 结果
项目（缩写） 结果
DP3
+
生长控制（GC） +
七叶酸(ESC)
-
尿素（URE） -
丙二酸盐（MAL） -
多粘菌素（PXB ） -
麦芽糖(MLT) -
木糖（XYL） -
山梨醇（SOR）
-
肌醇(IND)
- 精氨酸(ARG)
- 临位硝基苯酚（ONP）
-
阿拉伯糖（ARA） -
乙酸胺（ACE）
-
鸟氨酸（ORN）
+
葡萄糖氧化（OFG）+
色氨酸（TDA） -
乳糖（LAC）
-
枸橼酸（CIT ） -
棉子糖（RAF）
-
蔗糖发酵（SUC） -
甘露醇（MAN） -
硫化氢(H2S) -
鼠李糖（RHA）
-
腺苷（ADO）
-
赖氨酸（LYS） +
氧化酶（OXI） -
核糖（GLU ） +
2.4 细菌感染结果
以分离到的迟钝爱德华细菌的一个代表株感染健康南方鲆10尾，对照组2尾。在感染后第5天，感染组的南方鲆全部死亡。死鱼腹部肿胀，肛门红肿、肠管脱出，解剖后发现腹腔内有大量的渗出液，肝脏变白变脆，脾脏和肾脏均有不同程度的肿大，观察到的病变与自然感染死亡相一致。对照组南方鲆没有出现死亡。
2.5药敏试验结果
用18种药物试纸对南方鲆迟钝爱德华氏菌进行抑菌试验，结果见表2。链霉素、环丙沙星、头孢拉定、阿莫西林、先锋噻肟、菌必治、先锋Ⅴ、复达欣对该菌的抗菌效果较好，其他为中低等或无效药物。
表2
致病菌对药物的敏感性
药物名称
抑菌圈直径（mm）
药物名称
抑菌圈直径（mm）
羧苄青霉素（100ug/片） 24
氟哌酸（10ug/片）
0
链霉素（10ug/片 ）
30
阿莫西林（10ug/片）
32
庆大霉素（10ug/片） 20
先锋噻肟（30ug/片）
30
环丙沙星（5ug/片）
30
菌必治（30ug/片）
32
多粘菌素（30ug/片） 22
氧氟沙星（5ug/片）
34
头孢噻吩（30ug/片） 28
先锋Ⅴ（30ug/片）
30
新霉素（30ug/片）
25
复方新诺明（23.7/1.25ug/片） 0
利福平（5ug/片）
15
林可霉素（2ug/片）
10
头孢拉定（30ug/片） 30
复达欣（30ug/片）
30
2.6临床用药结果
根据药敏试验的结果，选用硫酸链霉素按30~50mg/kg的比例与日常饲料搅拌后投喂，连喂7d，治愈率达到80% 。
3讨论
3.1 南方鲆腹水症病因探讨
通过对患腹水症南方鲆进行临床解剖、细菌分离鉴定以及感染回归试验，证明了迟钝爱德华氏菌是南方鲆腹水症的病原。经过对分离菌株进行药敏试验分析，证实链霉素、环丙沙星、头孢拉定、阿莫西林、先锋噻肟、菌必治、先锋Ⅴ、复达欣等均为高效药物。我们选用硫酸链霉素进行南方鲆的腹水症治疗，取得了较满意的效果。
尽管如此，南方鲆因腹水症而死亡的病例仍时有发生（死亡率约20%左右），说明使用抗生素类药物并不能完全治疗和控制南方鲆腹水症的发生。究其原因，可能有以下几方面。
（1）其它病原微生物感染存在。
（2）水温、水质、饲料等外界因素。南方鲆腹水症在水温超过25℃时较容易发生，一方面水温不是南方鲆生活的最适温度；另一方面水体中的病原生物大量滋生，该病原菌最适生长水温为25℃～
30℃
，将水温降到20℃以下，可使发病率和死亡率都有明显降低。养殖用水中的各种寄生虫，如车轮虫、刺激隐核虫等会损伤鱼的体表，为细菌的感染提供途径；养殖用水盐度过低时更易感染此病，很多养殖场为避免夏季水温过高而大量兑入地下淡水，致使养殖用水盐度低于18‰而导致本病的发生［7-9]。
（3）迟钝爱德华细菌的耐药性，可在部分鱼体内继续存在。
3.2 南方鲆腹水症的有效防治措施
南方鲆腹水病一旦发生，其完全治愈的困难非常大，因此对此病的有效预防措施便显得尤为重要。笔者认为预防南方鲆腹水病必须做好以下几点：
（1）严格砂滤养殖用水,除去各种寄生虫，同时用紫外线或臭氧装置进行消毒。
（2）清池或更换网箱时要尽量避免鱼体受伤，操作后要用抗生素进行药浴，以防出现伤口被病原菌继发感染。
（3）放养密度切勿过大尤其在高水温期，随着牙鲆的生长要及时分池或分箱。过高密度下养殖的牙鲆对各种疾病的抵抗力均会下降。
（4）投喂饵料必须洁净。
（5）一旦发现病鱼要马上捞出隔离，否则会很快传染给其他健康的鱼［10］。
3.3牙鲆腹水病治疗
一旦发生腹水病，需结合以下措施综合治疗。
（1）对水的处理需要更为严格，方法参照预防措施。
（2）尽可能降低养殖用水的水温，低水温可使发病率和死亡率都有所降低。
（3）严格控制投饵量，使鱼处在70 %的饱食状态。
（4）降低养殖密度，减少鱼的应激性刺激。
（5）投喂药饵。选用硫酸链霉素按30~50mg/kg的比例与日常饲料搅拌后投喂，连喂7d。
（6）如为陆上工厂化养殖，在投喂药饵的同时可结合全池泼洒抗生素2～3 mg/l，可以提高治疗效果。
（7）如水中寄生虫数量较多，则应及时使用福尔马林或氯制剂予以杀灭。
参考文献
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